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科研 人類免疫缺陷病毒P24抗體(HIV-P24Ab)檢測試劑盒

產(chǎn)品品牌:睿信生物 商品貨號:RXT80226

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  • 產(chǎn)品售價: 4000 3000
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反應種屬
檢測范圍 0.5ng/mL – 8ng/mL
物理性能 各液體組分澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝,無破損漏氣。
用途 用于檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中人類免疫缺陷病毒 P24 抗體(HIVP24Ab)
的濃度。
實驗原理 本試劑盒采用間接兩步法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。在預包被人類免疫缺陷病毒 P24 抗體(HIVP24Ab)捕獲抗原(固相抗原)的微孔酶標板中,加入不同濃度校準品和待測樣本,經(jīng)過溫育與充分洗滌,去除未結合的組分,再加入 HRP 標記的檢測抗體(酶標抗體),經(jīng)過溫育與充分洗滌,去除未結合的組分,在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標抗體的夾心復合物。加底物 A 和 B,底物在 HRP 催化下,產(chǎn)生藍色產(chǎn)物,在終止液作用下,最終轉化為黃色,在酶標儀上測定吸光度(OD 值),吸光度(OD 值)與待測樣品中待測抗體的濃度呈正相關。擬合校準品曲線,可以計算出樣本待測抗體的濃度。
特異性 本試劑盒識別天然和重組人類免疫缺陷病毒 P24 抗體(HIVP24Ab),與結構類似物無交
叉。
重復性 批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于 10%;批間變異系數(shù) CV%小于 15%。
回收率 回收率在 85%-115%之間。
試驗所需自備試驗器材 1.標準規(guī)格酶標儀。
2.自動洗板機。
3.振蕩器。
4.系列可調節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,最好用多通道移液器。
操作程序 1、所有試劑和組分都先恢復到室溫,標準品、質控品和樣品,建議做復孔。
2、按前面試劑準備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設置標準品孔、樣本孔和空白孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL,樣本孔加待測樣本 50μL,空白孔不加,用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 30min。
5、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。如此重復 4 次(共洗板 5 次)。若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡 20s 的程序,可以提高檢測的精度。洗板結束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應板。
6、除空白孔外,標準品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體 100μL。
7、用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 30min。
8、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。如此重復 4 次(共洗板 5 次)。若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡 20s 的程序,可以提高檢測的精度。洗板結束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應板。
9、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合,所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 15min。
10、所有孔加入終止液 50μL,在酶標儀 450nm 波長下讀取各孔吸光度(OD 值)。
注意事項 1:如果試劑盒的組份需要再次使用,請確保上一次使用之后沒有被污染。
2:酶標板單次未使用完,要謹記密封放到 2-8℃保存。
問題分析 ①問題描述:標準曲線差
可能原因及相應對策:
1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡
2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌
3.移液不精確——檢查和校正移液器
②問題描述:精密度低
可能原因及相應對策:
1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡
2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑
3.重復利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模
4.加樣不精確——檢查和校正移液器
③問題描述:O.D值低
可能原因及相應對策:
1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器,精確加入試劑
2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間
3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度
4.酶標記物或底物失效——通過混合酶標記物和底物,顏色迅速顯現(xiàn)來檢查
5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液
6.超出讀數(shù)時間讀數(shù)——在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù)
④問題描述:樣本值
可能原因及相應對策:
1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本,使用新鮮樣本進行實驗
2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法
3.待測物質在樣本中含量低——使用新鮮樣本,重復實驗
聲明 該試劑盒僅供研究使用,如將其用于臨床診斷或任何其他用途,我公司將不對因此產(chǎn)生的問題負責,亦不承擔任何法律責任。

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